1.樣品處理：對被分離樣品有時要經過水解等化學處理，樣品溶液一般要兼顧到濃度與粘度兩方面。離子交換柱的安裝：層析柱內徑必須粗細均勻，柱管大小可據實際需要選擇。柱下端膠塞中插入一放液管，膠塞上蓋以園形尼龍綢或發泡塑料片以防止交換樹脂流出。裝柱：⑴裝柱質量是確保柱層析分離效果的技術關鍵之一，越是高技術層析(如使用毛細管層析柱的層析設備)裝柱的技術要求和難度越高，以至手工操作很難達到。⑵裝柱的質量要求，無論是手工、機械、自動化裝柱都是一樣的，要求裝入柱中的分離載體材料松緊適度，分布均勻，無氣泡、無斷層、無結節，能保持正常的溶脹形態和結構；⑶裝入柱中樹脂的高度與直徑之比因分離對象和分離目的不同而相差很大，本教材推薦的肝素鈉洗脫柱裝柱高度是柱徑的4～6倍。⑷操作次序，以手工裝入溶脹的D254樹脂(濕法裝柱)為例，其操作程序可概括為：①查連接(柱與塞之間、上下塞與進出液管之間、梯度混合器與進液管之間、出液管與收集器之間等等的連接是否正確、緊密)，②試止漏(塞子、接頭、活塞開關處在長時間滿負荷下不泄漏)，③加隔離緩沖墊(緊貼于柱子下端塞子的內平面)，④加少許平衡液于空柱內，⑤趕氣泡(緩沖墊內和出水管中的氣泡)，⑥開通放水開關，⑦與放水量保持相當的流速，向柱內勻速加完載體材料漿，⑧關閉放水開關，令樹脂自然下沉，⑨用洗滌液和清水洗滌樹脂，⑩后用緩沖液過柱和平衡柱，使樹脂結構平衡穩定，⑾在樹脂表面蓋上一片尼龍或泡膜塑料，并與柱子內壁保持嚴密接觸，以防加樣時樹脂泛起。加樣：緩緩打開柱子下端的放液開關,使柱內液面剛好降至樹脂面時便立即將樣品溶液小心地加到尼龍或泡膜塑料片上，待樣品液面剛好進入樹脂層內便立即加入少許平衡緩沖液,以清洗粘附在覆蓋層中的樣品，并隨之進入樹脂層。當柱內液位接近樹脂表面時便立即添加洗滌液進行洗滌操作。5.洗滌：選用合適的洗滌液、恰當的總用量及洗滌流速，小心洗滌柱內樹脂，以除去不被離交樹脂吸附的雜質。6.洗脫：由洗脫曲線找出洗脫液的佳濃度和適當的總量、操作壓及流速進行洗脫。7.監測：用敏感快速的方法(參見下文“測定”)監測分離成分是否洗脫出來以及洗脫峰的軸向分布8.收集：一旦發現待分離成分洗脫出來便可進行一步或分步收集，并可根據各成分洗脫峰的軸向分布和濃度監測，決定產品收集濃度區段，棄去的洗脫液可循環用于相同成分的洗脫。9.沉淀/離心：用沉淀劑可將分離組分沉淀或離心下來脫水干燥，沉淀劑回收再用。10.脫水干燥：加入適當脫水劑為如無水乙醇、丙酮或乙醚脫水后進一步干燥。11.測定：對層析所得產品可稱重或測定活性計算其得量和收率。【注意事項】1.應根據被分離物質的理化性質、分子大小、分子形狀和分離的目的要求，選擇分離效果好、交換容量大而機械強度較高的分離載體材料。市售的分離載體有明確的規格型號、理化性質、功能作用、活化再生和保養存放等技術參數資料可供用戶選擇。2.應根據分離純化的對象、規模選擇層析柱的長短、粗細、柱高與內徑之比，使達到佳分離效果；此外，柱子材料的化學性質要穩定、透明，內徑要均一、光滑，死腔要愈小愈好，要有利于緊固、連接、裝柱與維護。3.柱子安放要垂直、穩固，與之相連的各種線路、管道、設備、設施的布局和連接要緊奏，要方便操作、觀察與維護。4.要求裝入柱中的分離載體材料松緊適度，分布均勻，無氣泡、無斷層、無結節，能保持正常的溶脹形態和結構。5.保持柱內樹脂層面平整、層序結構始終如一是確保柱層析分離效果的又一技術關鍵。為此，從裝柱到洗脫結束的過程中，尤其是加樣、洗滌、洗脫過程中要始終保持柱內液位不低于柱內樹脂的頂部平面，尤其要始終保持柱內樹脂的層序結構始終如一，不被打亂，特別要防止更換濃度不同的洗滌洗脫液時發生“翻缸”而攪亂樹脂層結構，“壓缸”而造成柱層斷裂和梗塞斷流。6.注意保持一定的操作壓，這對確保層析柱流速和分離效果十分重要。因為流速不僅與洗脫液加在柱上的壓力(因液面差造成)有關，也與裝柱材料的粒度、交聯度、機械強度有關。應針對具體情況建立一個操作壓、流速和分離效果的佳平衡點.顯著標明各種洗滌、洗脫液的技術參數，嚴禁亂用和混用。7.制作洗脫曲線，確定洗脫液收集方案，設置洗脫監控點8.注意剔除破損樹脂，及時補足流失、破損的循環樹脂量。9.嚴格掌握新、舊樹脂的活化、再生條件，及時再生舊樹脂。樹脂的再生：每次洗脫結束，用清水將樹脂洗出柱體再用、再生，或用高濃度的NaCl溶液浸泡貯存。樹脂經過一段使用后樹脂上的活性基團因被交換而使交換容量大為降低，此時樹脂需要再生處理。大處理(酸—堿—酸)：加入樹脂2倍量的2mol HCL溶液攪拌3小時，自來水沖洗至中性；又用2mol NaOH溶液照酸處理方式處理；再用2mol HCL處理。小處理(堿—酸)：濃度、方法同上。連續用數次的樹脂進行小處理，用十次后的樹脂要進行大處理。10．注意脫水干燥條件。上海金鵬分析儀器有限公司 www.jp1718.com電話：021-36162366 60959971 61425398 手機： 13764356938 18918199710 13585698333 QQ:842727501，964122960，765695826， 2460311703， 2431022418，170324176傳真：021-36162369地址：上海市真陳路1398弄15號 郵編：200444